倉鼠HMG-CoA還原酶(HMGR)酶聯(lián)免疫剖析
發(fā)布時間: 2019/4/28 點擊次數(shù): 1208次
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研域(上海)化學(xué)試劑有限公司 |
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倉鼠HMG-CoA還原酶(HMGR)酶聯(lián)免疫剖析試劑盒運用說明書 本試劑盒僅供研究運用。 檢測規(guī)模: 96T 0.5U/L - 15U/L 運用意圖:本試劑盒用于測定倉鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中HMG-CoA還原酶(HMGR)的活性。 實驗原理:本試劑盒運用雙抗體夾心法測定標本中倉鼠HMG-CoA還原酶(HMGR)水平。用純化的倉鼠HMG-CoA還原酶(HMGR)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次參加HMG-CoA還原酶(HMGR),再與HRP符號的HMG-CoA還原酶(HMGR)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗刷后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的效果下轉(zhuǎn)化成終究的。se彩的深淺和樣品中的HMG-CoA還原酶(HMGR)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),經(jīng)過規(guī)范曲線核算樣品中倉鼠HMG-CoA還原酶(HMGR)活性濃度。 倉鼠HMG-CoA還原酶(HMGR)酶聯(lián)免疫剖析試劑盒運用說明書試劑盒組成
標本要求 1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能立刻進行實驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)防止重復(fù)凍融 2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3按捺辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 操作過程
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、規(guī)范孔、待測樣品孔。在酶標包被板上規(guī)范品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終究稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,悄悄晃動混勻。 3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 4.配液:將30倍濃縮洗刷液用蒸餾水30倍稀釋后備用 5.洗刷:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗刷液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。 6.加酶:每孔參加酶標試劑50μl,空白孔除外。 7.溫育:操作同3。 8.洗刷:操作同5。 9.顯色:每孔先參加顯色劑A50μl,再參加顯色劑B50μl,悄悄震動混勻,37℃避光顯色10分鐘. 10.停止:每孔加停止液50μl,停止反響(此刻藍色立轉(zhuǎn))。 11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加停止液后15分鐘以內(nèi)進行。 倉鼠HMG-CoA還原酶(HMGR)酶聯(lián)免疫剖析試劑盒運用說明書操作程序總結(jié):
核算 以規(guī)范物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出規(guī)范曲線,依據(jù)樣品的OD值由規(guī)范曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用規(guī)范物的濃度與OD值核算出規(guī)范曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,核算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。 倉鼠HMG-CoA還原酶(HMGR)酶聯(lián)免疫剖析試劑盒運用說明書注意事項 1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可運用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 2.濃洗刷液或許會有結(jié)晶分出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗刷時不影響成果。 3.各步加樣均應(yīng)運用加樣器,并常常校對其準確性,以防止實驗誤差。一次加樣時間應(yīng)當控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦運用排槍加樣。 4.請每次測定的一起做規(guī)范曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于規(guī)范品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋必定倍數(shù)(n倍)后再測定,核算時請終乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。 5.封板膜只限一次性運用,以防止交叉污染。 6.底物請避光保存。 7.嚴厲依照說明書的操作進行,實驗成果斷定有必要以酶標儀讀數(shù)為準. 8.一切樣品,洗刷液和各種廢棄物都應(yīng)按感染物處理。 9.本試劑不同批號組分不得混用。 保存條件及有效期 1.試劑盒保存:;2-8℃。 2.有效期:6個月 |
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