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    斑馬魚酰基輔酶A(Acyl-Coa)酶聯(lián)免疫分析

    發(fā)布時(shí)間: 2019/4/25  點(diǎn)擊次數(shù): 1006次
    提 供 商: 研域(上海)化學(xué)試劑有限公司 資料大?。?/td>
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    斑馬魚?;o酶A(Acyl-Coa)酶聯(lián)免疫分析試劑盒運(yùn)用說明書
    本試劑盒僅供研究運(yùn)用。
    檢測規(guī)模:  96T 12 U/L -550 U/L

    運(yùn)用意圖:本試劑盒用于測定斑馬魚血清、血漿及相關(guān)液體樣本中?;o酶A(Acyl-Coa)活性。
    斑馬魚?;o酶A(Acyl-Coa)酶聯(lián)免疫分析試劑盒試驗(yàn)原理
    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中斑馬魚酰基輔酶A(Acyl-Coa)水平。用純化的斑馬魚?;o酶A(Acyl-Coa)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中順次參加?;o酶A(Acyl-Coa),再與HRP標(biāo)記的?;o酶A(Acyl-Coa)抗體結(jié)合,構(gòu)成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗刷后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終究的。顏色的深淺和樣品中的?;o酶A(Acyl-Coa)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),經(jīng)過規(guī)范曲線核算樣品中斑馬魚?;o酶A(Acyl-Coa)活性濃度。 

    試劑盒組成 

    標(biāo)本要求 
    1.標(biāo)本收集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行試驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
    2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3按捺辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
    斑馬魚酰基輔酶A(Acyl-Coa)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟



    2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、規(guī)范孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上規(guī)范品加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終究稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,悄悄晃動(dòng)混勻。
    3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
    4.配液:將30倍濃縮洗刷液用蒸餾水30倍稀釋后備用
    5.洗刷:當(dāng)心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗刷液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
    6.加酶:每孔參加酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。 
    7.溫育:操作同3。
    8.洗刷:操作同5。
    9.顯色:每孔先參加顯色劑A50μl,再參加顯色劑B50μl,悄悄震動(dòng)混勻,37℃避光顯色10分鐘.
    10.停止:每孔加停止液50μl,停止反響(此刻藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
    11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加停止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
    斑馬魚酰基輔酶A(Acyl-Coa)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作程序總結(jié):


    核算
      以規(guī)范物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出規(guī)范曲線,根據(jù)樣品的OD值由規(guī)范曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用規(guī)范物的濃度與OD值核算出規(guī)范曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,核算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)踐濃度。 
    注意事項(xiàng)
    1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可運(yùn)用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
    2.濃洗刷液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗刷時(shí)不影響成果。
    3.各步加樣均應(yīng)運(yùn)用加樣器,并常常校正其性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,引薦運(yùn)用排槍加樣。
    4.請每次測定的一起做規(guī)范曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于規(guī)范品孔第yi孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,核算時(shí)請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
    5.封板膜只限一次性運(yùn)用,以避免交叉污染。
    6.底物請避光保存。
    7.嚴(yán)格依照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)成果判定有必要以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
    8.所有樣品,洗刷液和各種廢棄物都應(yīng)按感染物處理。
    9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

    保存條件及有效期
    1.試劑盒保存:2-8℃。
    2.有效期:6個(gè)月
     

     

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